水中轮状病毒实时定量PCR外标准品的构建

论文类型	基础研究	发表日期	2008-02-01
来源	环境科学
作者	胡秀华,何苗,刘丽,李丹,施汉昌
关键词	轮状病毒;克隆;标准品;实时荧光定量PCR
摘要	采用细胞培养和T2A 克隆技术,在轮状病毒主要结构蛋白VP7 基因序列上设计合成引物,经PCR 扩增后将特异性产物连接入pGEM2T2easy 载体中,经过酶切鉴定和测序分析获得轮状病毒cDNA 标准品. 利用常规PCR 和实时定量PCR 方法对所获得的cDNA 标准品进行特异性、稳定性和重复性指标的检验. 结果表明,利用此标准品制备的标准曲线具有较高的扩增效率和良好的线性关系(斜率为- 31353 , R2 = 01995) ;实时定量PCR 熔解曲线分析表明,温度在81 ℃±015 ℃的PCR 产物是

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